1.內(nèi)參抗體
在 Western Blot 實(shí)驗(yàn)中，可能存在總蛋白濃度測(cè)定不準(zhǔn)確，或者蛋白質(zhì)樣品上樣時(shí)因?yàn)椴僮鞯犬a(chǎn)生誤差；這些誤差可以通過(guò)測(cè)定每個(gè)樣品中實(shí)際轉(zhuǎn)到膜上的內(nèi)參含量來(lái)進(jìn)行校正。
內(nèi)部參照即選取相同樣本中某個(gè)內(nèi)源表達(dá)的蛋白作為參照。通常會(huì)選擇由管家基因編碼的蛋白 (Housekeeping Proteins) 作為內(nèi)參，它們?cè)诟鹘M織和細(xì)胞中的表達(dá)相對(duì)恒定，在檢測(cè)蛋白的表達(dá)水平變化可以作為一個(gè)穩(wěn)定的參照物 ( 比如 GAPDH、β-Actin 等 )。
在 WB 實(shí)驗(yàn)中，蛋白的表達(dá)情況是通過(guò)與抗體的結(jié)合而體現(xiàn)的，也就是說(shuō)內(nèi)參蛋白的選擇問(wèn)題等同于內(nèi)參抗體的選擇問(wèn)題。
2.標(biāo)簽抗體
在生物技術(shù)中，人們常利用 DNA 重組技術(shù)構(gòu)建包含目的基因以及表位標(biāo)記的融合蛋白，即標(biāo)簽融合蛋白，再利用能特異性識(shí)別該標(biāo)簽的抗體對(duì)其進(jìn)行鑒定與純化。整個(gè)反應(yīng)的原理是基于抗原 - 抗體反應(yīng)，標(biāo)簽抗體可以高度特異地結(jié)合對(duì)應(yīng)的標(biāo)簽融合蛋白。
融合標(biāo)簽可以簡(jiǎn)化蛋白質(zhì)的純化過(guò)程、控制蛋白質(zhì)固定的空間取向及方便檢測(cè)、使體內(nèi)生物事件可視化、提高重組蛋白質(zhì)的產(chǎn)量、增強(qiáng)重組蛋白質(zhì)的可溶性和穩(wěn)定性等。常用的標(biāo)簽包括 Flag、His、myc、HA、GST、GFP 等。
標(biāo)簽抗體可用于檢測(cè)或純化表達(dá)載體上的標(biāo)簽序列，從而研究目標(biāo)蛋白的表達(dá)水平與功能。標(biāo)簽抗體現(xiàn)在已經(jīng)成為基因表達(dá)和基因功能信號(hào)轉(zhuǎn)導(dǎo)等研究中的常用工具。
