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miRNA與靶基因調(diào)控研究
簡(jiǎn)介

miRNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶基因的3'UTR區(qū)，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。因此，可以將目的基因的3'UTR區(qū)域構(gòu)建到含luciferase的報(bào)告基因質(zhì)粒上，和miRNA mimics/inhibitors以及海腎內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，通過(guò)檢測(cè)熒光值的變化，判斷miRNA對(duì)靶基因的作用。再通過(guò)對(duì)3'UTR區(qū)進(jìn)行定點(diǎn)突變的方法進(jìn)一步確定miRNA與靶基因3'UTR的作用位點(diǎn)。miRNA對(duì)靶基因功能的調(diào)控是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。通過(guò)利用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)尋找或驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控作用是當(dāng)前最常用的技術(shù)。

PGL3-CMV-LUC-MCS.png

常用載體：PGL3-CMV-LUC-MCS

特點(diǎn)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)具有如下特點(diǎn)：

（1）靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍廣、應(yīng)用靈活；

（2）轉(zhuǎn)錄后無(wú)需翻譯即具有生物活性；

（3）實(shí)驗(yàn)中報(bào)告基因和對(duì)照基因的酶沒(méi)有種源同源性；

（4）螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中不存在交叉干擾。


miRNA與靶基因相互作用研究主要包含：

（1）miRNA與靶基因結(jié)合驗(yàn)證：驗(yàn)證miRNA與靶基因（mRNA，lncRNA,circRNA）結(jié)合作用；

（2）ceRNA作用研究：驗(yàn)證不同把好基因?qū)iRNA的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合作用。

miRNA與3'UTR.png

miRNA與mRNA 3'UTR報(bào)告基因原理示意圖

服務(wù)流程
優(yōu)勢(shì)

（1）吉滿生物可根據(jù)客戶需求提供實(shí)驗(yàn)方案，評(píng)估項(xiàng)目可行性，提供一站式服務(wù)；

（2）吉滿生物具有豐富的分子克隆報(bào)告基因檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，可快速獲得結(jié)果，周期較短。

案例展示
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分
類
miRNA與靶基因調(diào)控研究
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miRNA通過(guò)堿基互補(bǔ)配對(duì)的方式識(shí)別靶基因的3'UTR區(qū)，并根據(jù)互補(bǔ)程度的不同指導(dǎo)沉默復(fù)合體降解靶mRNA或者阻遏靶mRNA的翻譯。因此，可以將目的基因的3'UTR區(qū)域構(gòu)建到含luciferase的報(bào)告基因質(zhì)粒上，和miRNA mimics/inhibitors以及海腎內(nèi)參質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染，通過(guò)檢測(cè)熒光值的變化，判斷miRNA對(duì)靶基因的作用。再通過(guò)對(duì)3'UTR區(qū)進(jìn)行定點(diǎn)突變的方法進(jìn)一步確定miRNA與靶基因3'UTR的作用位點(diǎn)。miRNA對(duì)靶基因功能的調(diào)控是當(dāng)前研究的熱點(diǎn)。通過(guò)利用熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)實(shí)驗(yàn)尋找或驗(yàn)證miRNA對(duì)靶基因的調(diào)控作用是當(dāng)前最常用的技術(shù)。

PGL3-CMV-LUC-MCS.png

常用載體：PGL3-CMV-LUC-MCS

特點(diǎn)

雙熒光素酶報(bào)告基因檢測(cè)系統(tǒng)具有如下特點(diǎn)：

（1）靈敏度高、動(dòng)態(tài)范圍廣、應(yīng)用靈活；

（2）轉(zhuǎn)錄后無(wú)需翻譯即具有生物活性；

（3）實(shí)驗(yàn)中報(bào)告基因和對(duì)照基因的酶沒(méi)有種源同源性；

（4）螢火蟲熒光素酶和海腎熒光素酶對(duì)應(yīng)不同的反應(yīng)底物，反應(yīng)中不存在交叉干擾。


miRNA與靶基因相互作用研究主要包含：

（1）miRNA與靶基因結(jié)合驗(yàn)證：驗(yàn)證miRNA與靶基因（mRNA，lncRNA,circRNA）結(jié)合作用；

（2）ceRNA作用研究：驗(yàn)證不同把好基因?qū)iRNA的競(jìng)爭(zhēng)性結(jié)合作用。

miRNA與3'UTR.png

miRNA與mRNA 3'UTR報(bào)告基因原理示意圖

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（1）吉滿生物可根據(jù)客戶需求提供實(shí)驗(yàn)方案，評(píng)估項(xiàng)目可行性，提供一站式服務(wù)；

（2）吉滿生物具有豐富的分子克隆報(bào)告基因檢測(cè)經(jīng)驗(yàn)，可快速獲得結(jié)果，周期較短。

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