細(xì)胞自噬，簡(jiǎn)單的說(shuō)就是“吃掉自己”。是真核生物中進(jìn)化保守的對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過(guò)程。該過(guò)程中一些損壞的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后，送入溶酶體(動(dòng)物)或液泡(酵母和植物)中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。自噬包括生理?xiàng)l件下的基礎(chǔ)型自噬和應(yīng)激條件下的誘導(dǎo)型自噬。研究表明，自噬能在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、衰老、免疫、腫瘤發(fā)生及神經(jīng)退行性疾病等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
自噬原理圖
自噬標(biāo)志物分子LC3，是微管相關(guān)蛋白輕鏈3(MAP1LC3)的簡(jiǎn)稱，它貫穿整個(gè)自噬過(guò)程，哺乳動(dòng)物的LC3可分為三種：LC3A、LC3B和LC3C。
自噬發(fā)生時(shí)，LC3蛋白合成后立即在其羧基端被Atg4所剪切，產(chǎn)生細(xì)胞漿定位的LC3-I。在自噬過(guò)程中，LC3-I會(huì)被包括Atg7和Atg3在內(nèi)的泛素樣體系所修飾和加工，產(chǎn)生分子量為14kD的LC3-II，并定位到自噬小體中。
LC3-II 的含量和發(fā)生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低。
吉滿自主研發(fā)出單熒光(綠光或紅光)標(biāo)記的自噬指示產(chǎn)品，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有自噬發(fā)生時(shí)，熒光-LC3融合蛋白會(huì)均勻地分散在細(xì)胞質(zhì)中，一旦細(xì)胞發(fā)生自噬活動(dòng)，熒光-LC3融合蛋白就會(huì)聚集并轉(zhuǎn)位到自噬體膜，此時(shí)在熒光顯微鏡下可清晰地觀察到明亮的熒光斑點(diǎn)，斑點(diǎn)數(shù)量的多少就代表了自噬活動(dòng)的強(qiáng)弱。
吉滿自主研發(fā)的雙熒光自噬慢病毒，可用于標(biāo)記及追蹤LC3以及自噬流的變化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達(dá)基團(tuán)，不受外界影響。由于自噬小體進(jìn)入第二階段后，與溶酶體進(jìn)行融合，形成自噬溶酶體。由于自噬溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境，導(dǎo)致PH下降，GFP淬滅，因此，GFP的減弱表明溶酶體與自噬小體融合形成了自噬溶酶體。而mRFP是一直穩(wěn)定表達(dá)的，因而可以通過(guò)GFP與mRFP的亮點(diǎn)比例來(lái)評(píng)價(jià)自噬流進(jìn)程。
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|
GM-0220LV04
|
pGMLV-GFP-hLC3-Puro Lentivirus
|
|
GM-0220LV05
|
pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus
|
|
GM-0220LV07
|
PGMLV-CMV-TurboRFP-EGFP-H_LC3 Lentivirus
|
| 產(chǎn)品貨號(hào) | 產(chǎn)品名稱 |
|
GM-0220LV04
|
pGMLV-GFP-hLC3-Puro Lentivirus
|
|
GM-0220LV05
|
pGMLV-CMV-RFP-GFP-hLC3-Puro Lentivirus
|
|
GM-0220LV07
|
PGMLV-CMV-TurboRFP-EGFP-H_LC3 Lentivirus
|
細(xì)胞自噬，簡(jiǎn)單的說(shuō)就是“吃掉自己”。是真核生物中進(jìn)化保守的對(duì)細(xì)胞內(nèi)物質(zhì)進(jìn)行周轉(zhuǎn)的重要過(guò)程。該過(guò)程中一些損壞的蛋白或細(xì)胞器被雙層膜結(jié)構(gòu)的自噬小泡包裹后，送入溶酶體(動(dòng)物)或液泡(酵母和植物)中進(jìn)行降解并得以循環(huán)利用。自噬包括生理?xiàng)l件下的基礎(chǔ)型自噬和應(yīng)激條件下的誘導(dǎo)型自噬。研究表明，自噬能在細(xì)胞穩(wěn)態(tài)、衰老、免疫、腫瘤發(fā)生及神經(jīng)退行性疾病等多種生理病理過(guò)程中發(fā)揮重要作用。
自噬原理圖
自噬標(biāo)志物分子LC3，是微管相關(guān)蛋白輕鏈3(MAP1LC3)的簡(jiǎn)稱，它貫穿整個(gè)自噬過(guò)程，哺乳動(dòng)物的LC3可分為三種：LC3A、LC3B和LC3C。
自噬發(fā)生時(shí)，LC3蛋白合成后立即在其羧基端被Atg4所剪切，產(chǎn)生細(xì)胞漿定位的LC3-I。在自噬過(guò)程中，LC3-I會(huì)被包括Atg7和Atg3在內(nèi)的泛素樣體系所修飾和加工，產(chǎn)生分子量為14kD的LC3-II，并定位到自噬小體中。
LC3-II 的含量和發(fā)生自噬的程度成正比，LC3-II/I比值的大小可估計(jì)自噬水平的高低。
吉滿自主研發(fā)出單熒光(綠光或紅光)標(biāo)記的自噬指示產(chǎn)品，當(dāng)細(xì)胞內(nèi)沒(méi)有自噬發(fā)生時(shí)，熒光-LC3融合蛋白會(huì)均勻地分散在細(xì)胞質(zhì)中，一旦細(xì)胞發(fā)生自噬活動(dòng)，熒光-LC3融合蛋白就會(huì)聚集并轉(zhuǎn)位到自噬體膜，此時(shí)在熒光顯微鏡下可清晰地觀察到明亮的熒光斑點(diǎn)，斑點(diǎn)數(shù)量的多少就代表了自噬活動(dòng)的強(qiáng)弱。
吉滿自主研發(fā)的雙熒光自噬慢病毒，可用于標(biāo)記及追蹤LC3以及自噬流的變化。其中GFP是酸敏感型GFP蛋白，而mRFP是穩(wěn)定的熒光表達(dá)基團(tuán)，不受外界影響。由于自噬小體進(jìn)入第二階段后，與溶酶體進(jìn)行融合，形成自噬溶酶體。由于自噬溶酶體內(nèi)的酸性環(huán)境，導(dǎo)致PH下降，GFP淬滅，因此，GFP的減弱表明溶酶體與自噬小體融合形成了自噬溶酶體。而mRFP是一直穩(wěn)定表達(dá)的，因而可以通過(guò)GFP與mRFP的亮點(diǎn)比例來(lái)評(píng)價(jià)自噬流進(jìn)程。
