轉(zhuǎn)錄因子是一類(lèi)參與基因轉(zhuǎn)錄調(diào)控的重要調(diào)節(jié)因子。不同轉(zhuǎn)錄因子的DNA結(jié)合結(jié)構(gòu)域識(shí)別不同基因啟動(dòng)子區(qū)特定的堿基序列,行使抑制或激活該基因轉(zhuǎn)錄的功能。將目的基因啟動(dòng)子區(qū)域(通常取轉(zhuǎn)錄起始位點(diǎn)TSS上游-2000bp)、或針對(duì)結(jié)合位點(diǎn)進(jìn)行突變、或分段截?cái)嘈蛄校瑯?gòu)建到報(bào)告基因載體luciferase的上游,共轉(zhuǎn)染轉(zhuǎn)錄因子過(guò)表達(dá)質(zhì)粒,通過(guò)熒光素酶活反映轉(zhuǎn)錄因子對(duì)啟動(dòng)子活性的調(diào)控作用。
啟動(dòng)子是基因的一個(gè)組成部分,作為基因表達(dá)的“開(kāi)關(guān)”,控制基因表達(dá)的起始時(shí)間和表達(dá)的程度。啟動(dòng)子本身并不控制基因活動(dòng),而是通過(guò)與稱(chēng)為轉(zhuǎn)錄因子的這種具有特殊結(jié)構(gòu)的蛋白質(zhì)結(jié)合而控制基因活動(dòng)的。也就是說(shuō)啟動(dòng)子是指能啟動(dòng)基因轉(zhuǎn)錄的序列,啟動(dòng)子對(duì)基因的表達(dá)是必須的,如果一個(gè)基因要表達(dá),那么它的前面一定要有一段啟動(dòng)子序列,RNA聚合酶等蛋白會(huì)結(jié)合到啟動(dòng)子上才能開(kāi)始基因的轉(zhuǎn)錄。但真核生物基因在無(wú)轉(zhuǎn)錄因子時(shí)處于不表達(dá)狀態(tài),因?yàn)镽NA聚合酶自身無(wú)法啟動(dòng)基因的轉(zhuǎn)錄,只有當(dāng)轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合到其識(shí)別的DNA序列上后,基因才開(kāi)始表達(dá)。
常用載體:pGL3-Basic(左) 、pGL3-Promoter(右)