動物活體內(nèi)光學(xué)成像(optical in vivo imaging)是基于分子影像學(xué)孕育而生的,主要采用生物發(fā)光(bioluminescence)與化學(xué)熒光(fluorescence)兩種技術(shù)在活體動物體內(nèi)進行生物標記,通過成像系統(tǒng)來觀測活體動物體內(nèi)腫瘤的生長及轉(zhuǎn)移,感染性疾病的發(fā)展進程、特定基因的表達等生物學(xué)過程。
熒光素酶的發(fā)光是生物發(fā)光,不需要激發(fā)光,但需要底物熒光素。熒光素酶在氧氣、ATP存在的條件下,給予外源(腹腔或靜脈注射)底物熒光素(luciferin),即可在幾分鐘內(nèi)發(fā)生氧化反應(yīng),生成氧化熒光素(oxyluciferin),并產(chǎn)生發(fā)光現(xiàn)象。此發(fā)光現(xiàn)象只有在活細胞內(nèi)才會產(chǎn)生,并且發(fā)光光強度與標記細胞的數(shù)目線性相關(guān)。在動物體內(nèi),光在傳播時會被散射和吸收,可見光主要是被血紅蛋白吸收,主要吸收的是可見光藍綠波段;但在大于600 nm的紅光波段,血紅蛋白的吸收作用比較小,也就是說,大量的光雖然有部分散射但可以透過組織和皮膚而被高靈敏CCD檢測到。通過選用適當?shù)腃CD鏡頭、成像暗箱,可由儀器量化檢測到光強度,同時反映出細胞的數(shù)量。
該項技術(shù)操作方便,測量迅速,圖像清晰,信噪比低,價格便宜,可精確定量,易于被大多數(shù)研究員接受,在動物體內(nèi)研究方面得到廣泛應(yīng)用。
熒光素發(fā)光反應(yīng)原理