RNA干擾(RNA interference, RNAi) 是一種進(jìn)化上保守的抵御轉(zhuǎn)基因或外來(lái)病毒侵犯的防御機(jī)制。將與靶基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物mRNA存在同源互補(bǔ)序列的雙鏈RNA(double strand RNA, dsRNA) 導(dǎo)入細(xì)胞后,能特異性地降解該mRNA,從而產(chǎn)生相應(yīng)的功能表型缺失。
RNAi提供了一種經(jīng)濟(jì)、快捷、高效的抑制特異基因表達(dá)的技術(shù)手段,有助于研究該基因在生物模型系統(tǒng)中的作用,是研究基因功能的重要工具,并且逐步成為病毒性疾病、遺傳性疾病以及腫瘤等的基因治療研究的一種手段?,F(xiàn)今發(fā)現(xiàn)的主要起干擾作用的RNAi主要有兩類小分子RNA:一類是microRNA(miRNA);另一類是siRNA (small interfering RNA)。
siRNA制備的方法一般有:化學(xué)合成siRNA,哺乳動(dòng)物細(xì)胞載體shRNA克隆和慢病毒載體shRNA克隆。
將慢病毒載體的shRNA質(zhì)粒與慢病毒包裝輔助質(zhì)粒和包膜質(zhì)粒共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞,收集上清進(jìn)行濃縮純化,獲取高滴度的慢病毒,相對(duì)于SiRNA和shRNA質(zhì)粒,shRNA慢病毒的感染范圍更廣,如依賴轉(zhuǎn)染試劑難轉(zhuǎn)染的細(xì)胞:原代細(xì)胞、懸浮細(xì)胞等,并可實(shí)現(xiàn)穩(wěn)定、長(zhǎng)效抑制基因表達(dá)。
干擾原理(圖片來(lái)源:RNA Therapeutics Institute)