背景介紹
隨著生物醫(yī)學(xué)研究的快速發(fā)展，小動(dòng)物活體成像技術(shù)逐漸成為生命科學(xué)領(lǐng)域中一項(xiàng)重要的研究工具。
活體成像技術(shù)，即在不損傷生物體的情況下，通過高精度的成像手段觀察生物體內(nèi)的生理、病理變化。這一技術(shù)的廣泛應(yīng)用不僅極大推動(dòng)了基礎(chǔ)醫(yī)學(xué)研究的進(jìn)展，還對(duì)新藥研發(fā)、腫瘤治療、基因研究等多個(gè)領(lǐng)域產(chǎn)生了深遠(yuǎn)的影響。傳統(tǒng)的動(dòng)物模型實(shí)驗(yàn)方法存在一定局限性和不足，特別是需要大量的動(dòng)物分組和在不同時(shí)間點(diǎn)解剖獲取數(shù)據(jù), 得到多個(gè)時(shí)間點(diǎn)的實(shí)驗(yàn)結(jié)果，存在工作量大和組間差異問題。
相比之下，活體成像技術(shù)通過對(duì)同一組實(shí)驗(yàn)對(duì)象在不同時(shí)間點(diǎn)進(jìn)行成像，跟蹤同一觀察目標(biāo)（標(biāo)記細(xì)胞和標(biāo)記分子）的移動(dòng)及變化，不存在常見的組間差異，工作量和實(shí)驗(yàn)動(dòng)物消耗可大為減少，所得的數(shù)據(jù)也更加真實(shí)可信。此外, 活體成像技術(shù)不涉及放射性物質(zhì)，具有操作簡(jiǎn)單，所得結(jié)果直觀，靈敏度高等特點(diǎn)，可用于追蹤靶細(xì)胞數(shù)量，體積變化和體內(nèi)分布，從分子和細(xì)胞水平對(duì)藥物療效進(jìn)行評(píng)估。
常見問題分析（FAQ）
| Q | 熒光素鈉鹽和熒光素鉀鹽有什么區(qū)別？ |
| A | 二者在使用效果上無明顯差異，均溶于水，但熒光素鈉鹽溶解度(100mg/mL)要高于熒光素鉀鹽(60mg/mL)。在體內(nèi)實(shí)驗(yàn)研究中，研究者更傾向于選擇熒光素鉀鹽。 |
| Q | 為什么溶解熒光素鈉鹽或者鉀鹽的時(shí)候需用不含Ca2+或Mg2+離子的PBS，有無別的鹽溶液可用來溶解熒光素？ |
| A | PBS中的Ca2+、Mg2+抑制某些蛋白酶的活性。此外 Mg2+是催化熒光氧化的重要因素，Ca2+是和腔腸素氧化有關(guān)的離子，因此建議使用DPBS,其他的鹽溶液也可用來溶解熒光素，但要避免溶液中的陽離對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響。 |
| Q | 描述熒光素酶的發(fā)光特性？ |
| A | 熒光素腹腔注射老鼠后約1 min后，能夠表達(dá)熒光素酶的細(xì)胞開始發(fā)光，10 min后強(qiáng)度達(dá)到穩(wěn)定的最高點(diǎn)，在最高點(diǎn)持續(xù)約20-30 min后開始衰減，約3 h后熒光素排除，發(fā)光全部消失，最好的檢測(cè)時(shí)間是在注射后15-35 min內(nèi)。其動(dòng)力學(xué)曲線如下圖： |
| Q | 怎么將熒光素注入小鼠體內(nèi)，注射方法之間的區(qū)別是什么？ |
| A | 熒光素可通過腹腔注射或尾部靜脈注射注入小鼠體內(nèi)。約1min可擴(kuò)散到小鼠全身。大部分情況下使用熒光素濃度為150mg/kg。20g的小鼠約使用3mg的熒光素即可。 對(duì)于腹腔注射來講，擴(kuò)散較慢，開始發(fā)光較慢，持續(xù)發(fā)光時(shí)間較長(zhǎng)。 對(duì)于熒光素的尾部靜脈注射，擴(kuò)散快，開始發(fā)光快，但發(fā)光持續(xù)時(shí)間較短。 |
| Q | 熒光素底物可以透過血腦屏障嗎？ |
| A | 底物熒光素，約280道爾頓，其脂溶性非常好，很容易透過血腦屏障。注射一次熒光素能保持小鼠體內(nèi)熒光素酶標(biāo)記的細(xì)胞發(fā)光30-45 min。每次熒光素酶催化反應(yīng)只產(chǎn)生一個(gè)光子，這是肉眼無法觀察到的。 |
| Q | 用熒光素進(jìn)行活體成像與綠色熒光蛋白檢測(cè)體內(nèi)發(fā)光相比優(yōu)勢(shì)何在？ |
| A | 熒光素酶的偏紅光比綠色熒光蛋白的綠光在體內(nèi)的穿透性要強(qiáng)近100倍。 熒光素是靠和熒光素酶的相互作用發(fā)光，特異性很強(qiáng)，得到的信噪比較高； 熒光蛋白需要激發(fā)光來產(chǎn)生反射光，但是在檢測(cè)的過程中，老鼠的皮毛，皮膚都會(huì)產(chǎn)生非特異性熒光，使得信噪比降低。熒光蛋白檢測(cè)更適合于體外檢測(cè)，熒光素酶的檢測(cè)更適合于體內(nèi)檢測(cè)。 |
吉滿產(chǎn)品
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產(chǎn)品詳情可復(fù)制鏈接查看：zxpdf.cn/product?id=316
案例展示
案例一：YAP-Activated SATB2 Is a Coactivator of NRF2 That Amplifies Antioxidative Capacity and Promotes Tumor Progression in Renal Cell Carcinoma
發(fā)表期刊：Cancer Research
影響因子：12.5001
發(fā)表單位：浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院
吉滿助力（原文引用）
“Transduction with the CMV-Luc-PGK-puro lentivirus（Genomeditech）facilitated the detection of tumor growth in the lung by intravital imaging.”
圖片來源于doi:10.1158/0008-5472.CAN-22-1693
F：使用親本或 SATB2 缺陷型 786-O 細(xì)胞進(jìn)行原位腎移植后，小鼠從第 7 天至第 56 天分別用或不用 5-FU 處理的代表性 BIL 圖；
右圖，腎臟中 BIL 信號(hào)的量化
案例二：JP3, an antiangiogenic peptide, inhibits growth and metastasis of gastric cancer through TRIM25/SP1/MMP2 axis
發(fā)表期刊：Journal of Experimental & Clinical Cancer Research
影響因子：11.3997
發(fā)表單位：南京醫(yī)科大學(xué)
吉滿助力（原文引用）
“CMV-Luc-Puro lentiviral vectors (Genomeditech, Shanghai, China) were transfected into B16F0 and B16F10 cells and used for the bioluminescence assay.”
圖片來源于doi:10.1186/s13046-020-01617-8
H：利用IVIS體內(nèi)圖像系統(tǒng)檢測(cè)小鼠體內(nèi)的熒光素酶信號(hào)并拍照
案例三：Glycine Decarboxylase (GLDC) Plays a Crucial Role in Regulating Energy Metabolism, Invasion, Metastasis and Immune Escape for Prostate Cancer
發(fā)表期刊：International Journal of Biological Sciences
影響因子：8.1996
發(fā)表單位：南方醫(yī)科大學(xué)
吉滿助力（原文引用）
“22RV1 cells were cotransfected with luciferase lentivirus (Genomeditech, Shanghai, China)”
圖片來源于doi: 10.7150/ijbs.85893
I：p-GLDC組、p-MT-GLDC組、p-NC組小鼠原位移植瘤圖像
J：p-GLDC組、p-MT-GLDC組、p-NC組腫瘤體積
K：記錄每只小鼠肺、肝、腎、胰腺、睪丸、前列腺等轉(zhuǎn)移灶的熒光素酶表達(dá)強(qiáng)度
L：腫瘤轉(zhuǎn)移的器官分布頻率
