研究背景
腎細(xì)胞癌(renal cell carcinoma,RCC)是泌尿系統(tǒng)常見的惡性腫瘤,約占腎癌的90%。腎透明細(xì)胞癌 (ccRCC)是RCC的主要病理亞型，約占RCC的 70%。ccRCC起病隱匿，早期缺乏特異性臨床癥狀，易被誤診。目前，ccRCC的治療主要以手術(shù)結(jié)合靶向藥物為主。然而，早期診斷的困難、靶向藥物的耐受性和患者生存率的巨大波動是對抗ccRCC的挑戰(zhàn). 因此，研究ccRCC的發(fā)病機制，探索針對ccRCC患者的新治療方法，成為當(dāng)前腫瘤研究的熱點。
文獻來源
近日，華中科技大學(xué)同濟醫(yī)學(xué)院附屬協(xié)和醫(yī)院泌尿外科章小平課題組等人在Cancer Communications發(fā)表研究性論文“N6-methyladenosine-modified DBT alleviates lipid accumulation and inhibits tumor progression in clear cell renal cell carcinoma through the ANXA2/YAP axis-regulated Hippo pathway”，研究發(fā)現(xiàn)，DBT被證實是具有顯著預(yù)后預(yù)測價值的Hippo相關(guān)標(biāo)志物，其下調(diào)是由ccRCC 中的甲基轉(zhuǎn)移酶樣3(METTL3)介導(dǎo)的N6-甲基腺苷 (m6A)修飾引起的。功能研究表明DBT作為一種腫瘤抑制因子，可抑制腫瘤進展和糾正ccRCC中的脂質(zhì)代謝紊亂。機制研究上膜聯(lián)蛋白A2(ANXA2)與DBT的硫辛酰結(jié)合域相互作用，激活Hippo信號，導(dǎo)致 yes1相關(guān)轉(zhuǎn)錄調(diào)節(jié)因子(YAP)的核定位降低和脂肪生成基因的轉(zhuǎn)錄抑制。
DBT在ccRCC中下調(diào)提示預(yù)后不良
首先，通過高通量測序數(shù)據(jù)顯示ccRCC與鄰近組織相比，Hippo通路中相關(guān)基因表達具有差異，進一步篩選結(jié)合臨床數(shù)據(jù)分析，發(fā)現(xiàn)DBT在ccRCC中下調(diào)，是ccRCC不良預(yù)后的預(yù)測因子。
（Fig.1 DBT在ccRCC中下調(diào)提示預(yù)后不良)
METTL3通過DBT的3‘UTR中的1672位點介導(dǎo)的m6A甲基化降低ccRCC中DBT的表達
其次，假設(shè)DBT的mRNA被m6A調(diào)控因子修飾，如甲基轉(zhuǎn)移酶復(fù)合物。MeRIP-qPCR檢測結(jié)果顯示，m6A修飾的DBT在A498和CAKI-1細(xì)胞中的富集程度高于HEK293細(xì)胞。結(jié)合生信預(yù)測和雙熒光素酶檢測研究DBT與METTL3的互作，證明了METTL3通過DBT的3‘UTR中的1672 位點介導(dǎo)的m6A甲基化降低ccRCC中DBT的表達。
(Fig.2 METTL3介導(dǎo)的m6A修飾參與DBT下調(diào))
DBT在ccRCC中發(fā)揮抑癌作用
體內(nèi)外功能研究中，過表達DBT會抑制ccRCC的增殖，遷移和侵襲能力，并顯著抑制了腫瘤的轉(zhuǎn)移，減少了肝臟中轉(zhuǎn)移淋巴結(jié)的數(shù)量，表明DBT在ccRCC 中發(fā)揮抑癌作用；
(Fig.3 DBT在體外和體內(nèi)抑制了ccRCC的進展)
DBT是ccRCC脂質(zhì)積累的調(diào)節(jié)因子
由于ccRCC最突出的生物學(xué)特征是細(xì)胞內(nèi)脂滴積累，因此本研究通過敲低DBT和過表達DBT研究對脂質(zhì)代謝的調(diào)控，研究發(fā)現(xiàn)過表達DBT后細(xì)胞中脂質(zhì)積累減少，敲低DBT則相反。在油紅染色和脂質(zhì)相關(guān)基因檢測結(jié)果與此一致，以上證明DBT是ccRCC脂質(zhì)積累的調(diào)節(jié)因子。
(Fig.4 DBT 減少了ccRCC中的脂質(zhì)積累)
Fig.5 DBT激活Hippo信號以抑制YAP的轉(zhuǎn)錄活性
DBT對ccRCC中Hippo通路是否有影響，作者檢測了 Hippo通路核心組分的RNA水平，結(jié)果表明DBT過表達細(xì)胞中磷酸化的YAP有所增加，并抑制了YAP的核定位，脂質(zhì)通路相關(guān)基因的表達降低。敲低細(xì)胞模型與之相反。證實DBT激活了Hippo通路，進而抑制了ccRCC中的脂質(zhì)積累和腫瘤進展。
(Fig.5 DBT激活Hippo信號以抑制YAP的轉(zhuǎn)錄活性)
DBT通過與ANXA2發(fā)生直接相互作用，調(diào)節(jié)Hippo通路并抑制癌癥進展和脂質(zhì)積累
為了進一步確定DBT如何調(diào)節(jié)Hippo信號，通過數(shù)據(jù)庫分析及免疫沉淀實驗，發(fā)現(xiàn)DBT通過與ANXA2發(fā)生直接相互作用，調(diào)節(jié)Hippo通路并抑制癌癥進展和脂質(zhì)積累；
(Fig.6 DBT通過與ANXA2相互作用來調(diào)節(jié)Hippo信號)
DBT-ANXA2-YAP軸在體內(nèi)抑制腫瘤進展和脂質(zhì)積累
最后通過皮下腫瘤模型和轉(zhuǎn)移性腫瘤模型在體內(nèi)研究了DBT-ANXA2-YAP軸的功能，DBT過表達產(chǎn)生了有效的腫瘤生長抑制，而ANXA2的敲低可以逆轉(zhuǎn)由 DBT過表達引起的生長抑制，之后對脂質(zhì)通路的相關(guān)基因進行驗證，證實DBT-ANXA2-YAP軸抑制了腫瘤進展并抑制了ccRCC中的脂質(zhì)積累。
(Fig.7 DBT-ANXA2-YAP軸在體內(nèi)抑制腫瘤進展和脂質(zhì)積累)
綜上所述，該研究表明DBT通過與ANXA2相互作用來調(diào)節(jié)Hippo通路，ANXA2引導(dǎo)YAP被磷酸化抑制。由METTL3介導(dǎo)的m6A 修飾誘導(dǎo)的DBT異常下調(diào)通過增加YAP的核定位促進ccRCC的進展和脂質(zhì)積累。因此，本研究揭示了調(diào)節(jié)ccRCC 中YAP活性和脂質(zhì)代謝的重要調(diào)節(jié)機制，并為開發(fā)針對YAP或DBT m6A修飾的ccRCC治療策略提供了理論指引。
（Fig.8 ccRCC中DBT的機制方案）
吉滿助力
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