研究背景
非酒精性脂肪性肝病(NAFLD)是慢性肝病最常見的病因之一，也是全球肝硬化和肝細(xì)胞癌的主要病因。起因于人們飲食和生活方式的改變，NAFLD的流行率以驚人的速度全球范圍內(nèi)流行，包括慢性乙型肝炎(CHB)流行的亞洲，因而在亞洲NAFLD和CHB同時(shí)發(fā)生成為一種較為常見的現(xiàn)象。然而脂肪肝發(fā)病在CHB預(yù)后中的發(fā)病機(jī)制尚未完全闡明，了解其潛在的分子機(jī)制將有助于識(shí)別有效的分子診斷標(biāo)志物和治療靶點(diǎn)。
文獻(xiàn)來源
山東省立醫(yī)院楊紅麗所在課題組等人發(fā)表題為：ADAR1 Inhibits HBV DNA Replication via Regulating miR-122-5p in Palmitic Acid Treated HepG2.2.15 Cells的一文，探討了CHB并發(fā)NAFLD患者肝組織中ADAR1和miR-122的表達(dá)水平，通過棕櫚酸誘導(dǎo)乙肝合并脂肪肝細(xì)胞模型，明確了ADAR1通過調(diào)控miR-122抑制HBV DNA復(fù)制的分子機(jī)制。
項(xiàng)目研究
ADAR1是腺苷脫氨酶ADAR最常見的形式，已知參與各種病毒的復(fù)制。miR-122作為慢性乙肝肝臟損傷標(biāo)志物，對HBV表達(dá)有抑制作用。因此作者大膽地假設(shè)ADAR1可能影響miR-122的表達(dá)，從而參與HBV DNA復(fù)制的調(diào)控。與CHB患者相比，CHB并發(fā)NAFLD患者肝組織中ADAR1蛋白和mRNA的表達(dá)均顯著下調(diào)，miR-122表達(dá)趨勢與此相同。HBeAg蛋白表達(dá)明顯升高，CHB并發(fā)NAFLD患者出現(xiàn)明顯的脂肪空泡。
（圖1 CHB并發(fā)NAFLD患者的肝臟中ADARl、miR-122的表達(dá)水平）
為探討病理狀態(tài)下CHB并發(fā)NAFLD的分子機(jī)制，我們采用棕櫚酸處理HepG2.2.15建立乙肝合并脂肪肝細(xì)胞模型，與對照組相比，誘導(dǎo)模型組的AST和ALT水平均顯著升高，HBV DNA、HBeAg濃度以及HBV DNA表達(dá)增加。同時(shí)，ADAR1表達(dá)和脂肪聚積與CHB合并NAFLD患者肝組織中的驗(yàn)證結(jié)果保持一致。 （圖2 棕櫚酸處理的HepG2.2.15細(xì)胞中升高的HBV相關(guān)標(biāo)志物） （圖3 ADARl在棕櫚酸處理的HepG2.2.15細(xì)胞中下調(diào)） 作者通過miR-122敲低/過表達(dá)分子操作，進(jìn)一步評估了miR-122在棕櫚酸處理的HepG2.2.15細(xì)胞中對HBV DNA和HBeAg水平的影響，結(jié)果表明miR-122對HBV DNA復(fù)制起抑制作用。構(gòu)建ADAR 1過表達(dá)和shRNA慢病毒(Genomeditech)用于感染棕櫚酸處理的HepG2.2.15細(xì)胞，驗(yàn)證發(fā)現(xiàn)miR-122與ADAR1之間呈正相關(guān)，ADARl的過表達(dá)能夠顯著抑制HBV DNA和HBeAg的表達(dá)，敲低后反之。也就是說，ADAR1負(fù)調(diào)控肝細(xì)胞中的HBV DNA水平，并且證實(shí)了這種抑制作用通過增加miR-122水平來實(shí)現(xiàn)。 （圖4 miR-122抑制棕櫚酸處理的HepG2.2.15細(xì)胞中的HBVDNA水平） （圖5 ADARl下調(diào)HBV DNA水平并增加miR-122表達(dá)） 具體分子機(jī)制如下： 吉滿助力 本研究中所用ADAR1過表達(dá)及shRNA慢病毒均由吉滿生物提供。 如想了解更多質(zhì)粒構(gòu)建,病毒包裝,穩(wěn)轉(zhuǎn)株構(gòu)建,敲除細(xì)胞株,報(bào)告基因檢測等相關(guān)服務(wù)。歡迎訪問吉滿生物官網(wǎng)：zxpdf.cn 免費(fèi)咨詢電話：400-627-9288 文獻(xiàn)來源：www.tandfonline.com/doi/full/10.2147/DMSO.S373385
