文獻(xiàn)解析
近期，浙江中醫(yī)藥大學(xué)開國(guó)銀教授和浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院（浙江省中醫(yī)院）吳迪炯副主任醫(yī)師團(tuán)隊(duì)合作在《Journal of Advanced Research》（中科院一區(qū)TOP期刊，影響因子11.4）在線發(fā)表了題為“Integrated stress response activation induced by usnic acid alleviates BCL-2 inhibitor ABT-199 resistance in acute myeloid leukemia” 的研究論文。
背景簡(jiǎn)介
急性髓系白血病（AML）
急性髓系白血?。?span id="qqcw2skue" class="">AML）作為一種惡性克隆性疾病，其特征是骨髓原始細(xì)胞增殖伴擴(kuò)增和分化阻滯，影響正常造血作用，并導(dǎo)致危及生命的血細(xì)胞減少。AML可累及所有年齡段的人群，最常見于老年，診斷時(shí)的中位年齡為68歲[1]。
老年患者由于存在各類慢性疾病以及其不良基因組特征的發(fā)生率高，不適合標(biāo)準(zhǔn)化療或?qū)?biāo)準(zhǔn)化療不耐受，故而傾向于副反應(yīng)較低的治療方案，如去甲基化藥物和小劑量阿糖胞苷。然而，上述小分子藥物治療后的完全緩解率僅為20%，5年總生存率＜10%，因此需要其他低毒高效的AML治療藥物以提高AML老年患者的生存率[2]。
BCL-2抑制劑
近年來(lái)，一些靶向治療AML的新藥陸續(xù)上市，其中BCL-2抑制劑的出現(xiàn)極大地改善了老年AML患者的治療現(xiàn)狀。BCL-2選擇性抑制劑ABT-199是AML靶向治療時(shí)代的核心藥物，然而，約有30%的患者對(duì)ABT-199具有原發(fā)性耐藥，且一部分患者在接受ABT-199后出現(xiàn)顯著的繼發(fā)性耐藥，這是目前AML臨床面臨的主要難題。
因此，解析AML的耐藥機(jī)制，挖掘介導(dǎo)AML耐藥形成的關(guān)鍵因子及相應(yīng)靶向藥物，能夠?yàn)樘岣連CL-2抑制劑對(duì)AML難治性患者臨床療效提供科學(xué)依據(jù)和理論指導(dǎo)。
中藥療法
中藥治療白血病具有悠久的歷史，研究人員于上個(gè)世紀(jì)70年代首創(chuàng)三氧化二砷（砒霜）治療急性早幼粒細(xì)胞白血病，使得急性早幼粒細(xì)胞白血病成為首個(gè)可被治愈的腫瘤。
此后不斷有新的中藥單體及復(fù)方投入到抗AML的一線治療當(dāng)中，如，高三尖杉酯堿、復(fù)方浙貝顆粒、康艾注射液等，為AML患者帶來(lái)新希望。
“抗白延年湯”是浙江中醫(yī)藥大學(xué)附屬第一醫(yī)院血液科治療白血病的經(jīng)驗(yàn)方，開國(guó)銀教授團(tuán)隊(duì)與吳迪炯副主任醫(yī)師團(tuán)隊(duì)對(duì)其進(jìn)行了相應(yīng)方藥組份的篩選，發(fā)現(xiàn)其中有效成分松蘿酸可能對(duì)AML臨床耐藥，尤其是對(duì)BCL-2抑制劑耐藥的發(fā)生具有改善作用。
項(xiàng)目研究
本研究通過(guò)檢測(cè)ABT-199對(duì)7個(gè)不同基因背景AML細(xì)胞株的半數(shù)抑制濃度（IC50），選擇了其中對(duì)ABT-199敏感的2個(gè)AML細(xì)胞系：MOLM-13（FLT3-ITD突變）和THP-1（TP53突變），并進(jìn)行相應(yīng)耐藥細(xì)胞株的培養(yǎng)，最終建立了ABT-199耐藥細(xì)胞MOLM-13 R和THP-1 R。
研究結(jié)果顯示松蘿酸在低細(xì)胞毒性水平（MOLM-13 R:1.5μM；THP-1 R:4μM）下，成功恢復(fù)了MOLM-13 R和THP-1 R對(duì)ABT-199的敏感性。
為了研究上述協(xié)同作用的發(fā)生原因，即松蘿酸逆轉(zhuǎn)AML細(xì)胞對(duì)ABT-199耐藥的作用機(jī)制，團(tuán)隊(duì)成員通過(guò)RNA-seq深入分析了松蘿酸、ABT-199單用或聯(lián)合治療的轉(zhuǎn)錄譜。聯(lián)合治療組的EIF2AK1（HRI）對(duì)血紅素缺乏癥的反應(yīng)通路明顯增強(qiáng)，而HRI是eIF2α激酶的一種，可以磷酸化eIF2α從而激活綜合應(yīng)激反應(yīng)（ISR）。
為了確定聯(lián)合給藥對(duì)ISR的影響，作者檢測(cè)了ISR通路關(guān)鍵蛋白ATF4、CHOP和NOXA的表達(dá)水平，發(fā)現(xiàn)松蘿酸和ABT-199的聯(lián)用可通過(guò)HRI協(xié)同激活I(lǐng)SR。此外，本研究發(fā)現(xiàn)敲低eIF2α表達(dá)能夠抑制聯(lián)合給藥引起的細(xì)胞凋亡和ISR通路的激活，說(shuō)明松蘿酸聯(lián)合ABT-199的抗白血病作用涉及ISR激活（圖1），進(jìn)而逆轉(zhuǎn)AML對(duì)ABT-199的耐藥作用。
圖1 松蘿酸聯(lián)合ABT-199可通過(guò)HRI協(xié)同激活I(lǐng)SR
作者通過(guò)建立MOLM-13 R異種移植NSG小鼠模型進(jìn)一步證明了松蘿酸對(duì)ABT-199的增敏作用。結(jié)果發(fā)現(xiàn)松蘿酸聯(lián)用ABT-199能夠有效降低小鼠的腫瘤負(fù)荷，并且激活I(lǐng)SR通路，抑制MCL-1表達(dá)。此外，聯(lián)合給藥對(duì)小鼠的體重以及肝腎功能指標(biāo)無(wú)影響，體內(nèi)安全性高。這些數(shù)據(jù)提示了松蘿酸在增強(qiáng)ABT-199治療效果以及逆轉(zhuǎn)體內(nèi)耐藥性方面的關(guān)鍵作用（圖2）。
圖2 松蘿酸和ABT-199聯(lián)合使用可顯著減輕MOLM-13 R異種移植NSG小鼠的腫瘤負(fù)荷
綜上所述，松蘿酸通過(guò)觸發(fā)綜合應(yīng)激反應(yīng)，抑制MCL-1表達(dá)從而提高AML對(duì)ABT-199的化學(xué)敏感性（圖3）。上述研究為復(fù)發(fā)或難治性白血病患者提供了新的治療選擇，未來(lái)將繼續(xù)探索該聯(lián)合策略的臨床潛力與市場(chǎng)價(jià)值。
圖3 松蘿酸可以通過(guò)激活I(lǐng)SR緩解AML對(duì)BCL-2抑制劑耐藥
參考文獻(xiàn)
[1] Dinardo C, Erba H, Freeman S, et al. Acute myeloid leukaemia [J]. The Lancet, 2023, 401:2073-2086. DOI:10.1016/S0140-6736(23)00108-3.
[2] Webster J A, Pratz K W. Acute myeloid leukemia in the elderly: therapeutic options and choice [J]. Leukemia & Lymphoma, 2017:1-14. DOI:10.1080/10428194.2017.1330956.
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本研究中所用的Luciferase標(biāo)記慢病毒,MCL-1過(guò)表達(dá)慢病毒和對(duì)照病毒均由吉滿生物（Genomeditech）提供。
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